固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Bouin's固定液(Bouin's Fluid)主要由PA、甲醛、乙酸混合而成,PA可沉淀蛋白引起组织收缩,但不会使组织硬化,其与甲醛和乙酸混合后,穿透速度加快,固定均匀,组织收缩轻微,对细胞的微细结构显示的很清晰,为一种良好的固定液。尤其对Masson三色法等的结缔组织和肌纤维染色有媒染作用,经其固定后的组织着色鲜艳。该固定液也可能软化皮肤和肌腱,以利于切片。
【使用方法】
1、一般仅需固定30~60min。如果组织块大,可适当延长固定时间,但不宜超过24h。
2、用Bouin固定液固定后,组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水,经乙醇脱水时可除去大部分PA,组织留有一点黄色,对染色也无影响。
【注意事项】
1、Bouin's固定液对人体有一定的损害,请在通风好的环境下小心操作,避免吸入。
2、组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm,一般不超过6mm。
3、固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
4、温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
5、取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
【保存条件】
室温,避光,12个月。
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