【规格】 1ml/1.5ml
【保存】 2-8℃,12个月
【类型】 阳离子聚合物
【产品介绍】
BC Trans-DNA plus是一款专为难以转染的细胞设计的DNA转染试剂,它能够高效地传送质粒DNA。相较于其他转染试剂,BC Trans-DNA plus拥有卓越的DNA转染能力,其优势在于高转染效率、血清干扰小、低毒性、良好稳定性、操作简便以及出色的可重复性。
【应用范围】
BC Trans-DNA plus转染试剂表现出广泛的适用性,能够高效应对多种难转染细胞株的DNA转染需求,无论是瞬时转染还是稳定转染。特别值得一提的是,该试剂在多种贴壁细胞系中表现出色,尤其对于BMDC、4T1、CT26、DC2.4等难以转染的细胞类型,依然能够实现高转染效率,并且具备良好的重复性。
【质粒DNA转染步骤】
请确保所有操作都在无菌条件下进行,并遵循实验室的安全规范。
以24孔板为例,请参考表1的转染规模调整,步骤如下:
1. 细胞接种:在细胞培养板中,每孔接种0.5~1.0×105个细胞。将细胞在适宜条件下培养12~24小时,以确保在转染时细胞密度达到约60~70%的融合度。
2. DNA稀释:将所需的质粒DNA用Opti-MEM培养基稀释,使其终浓度达到0.1mg/mL。
3. 复合物制备:
(1)取1µL的BC Trans-DNA plus试剂原液,加入9µL的Opti-MEM培养基中。
(2)同时,取4µL浓度为0.1mg/mL的质粒DNA,加入6µL的Opti-MEM培养基中。
(3)将上述两者等体积混合,以形成转染复合物。
(4)室温静置:让转染复合物在室温下静置10分钟,以确保其充分结合。
4. 转染细胞:将20µL的转染复合物均匀加入到细胞培养板的每个孔中,并轻轻混匀。
5. 培养与检测:将细胞在37℃下继续培养18~48小时。在此期间,无需更换培养基。
【质粒DNA的转染优化】
可通过改变细胞密度、 DNA浓度以及BC Trans-DNA plus浓度对转染进行优化。保证细胞融合度在60%以上,BC Trans-DNA plus (µL):DNA (µg)可以在2:1和5:1之间调整。
表1. 不同培养板所需转染试剂和DNA的用量
培养板 |
| 接种 培养基 | Opti-MEM稀 释后终体积 | DNA转染 | |
试剂用量 | DNA | ||||
96孔板 | 0.3cm2 | 200µL | 10µL | 0.5µL | 0.2µg |
24孔板 | 2.0cm2 | 500µL | 20µL | 1µL | 0.4µg |
12孔板 | 4.0cm2 | 1mL | 40µL | 2.5µL | 1µg |
6孔板 | 10.0cm2 | 2mL | 100µL | 5µL | 2µg |
60mm | 20.0cm2 | 5mL | 0.2mL | 10µL | 4.0µg |
10cm | 60.0cm2 | 15mL | 0.6mL | 30µL | 12µg |
标签:细胞转染