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台盼蓝(Trypan blue)又称锥蓝或锥虫蓝等，分子式为 C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.81，CAS Number72-57-1，是一种阴离子型染料。Trypan blue不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，即产生所谓的拒染现象,而死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，是最常用的检测细胞活率的方法。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这不中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

Trypan blue stain(0.4%)常用于检测细胞膜的完整性以及细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，0.4%为最常用的浓度。

1、收集细胞：

如果收集贴壁细胞，应用胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞，收集细胞。如果收集悬浮细胞，则可以直接收集细胞。收集好的细胞在1000～2000g离心1min，弃上清，用1ml PBS重新悬浮细胞沉淀。

2、台盼蓝染色：

吸取100μl细胞悬液到1.5ml或0.5ml离心管内，加入100μlTrypan blue stain(0.4%)轻轻混匀，静置染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

3、细胞计数：

吸取经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少需要数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下：

细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

【注意事项】

1、Trypan blue stain对人体有轻微毒性，请注意小心防护。

2、注意凋亡小体偶尔也有台盼蓝拒染现象。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。