AML-12细胞是一种常用于研究肝脏疾病的细胞系。胚胎干细胞分泌因子能够显著增强AML-12细胞在恶劣培养条件下的抗凋亡能力，并且还能提高其糖酵解潜力、最大氧化呼吸能力以及氧化呼吸潜力。
AML12细胞胞体上有黑色颗粒及细胞胞体上有少量空泡是正常现象。该细胞培养体系较为特殊且对血清质量较为敏感，并且需要添加ITS，地塞米松维持细胞状态，建议使用本库配套培养体系（BC-C-MI-M-071）。
细胞培养步骤
【细胞复苏】
1、取出1mL冻存管后，迅速放入37℃水浴锅中不断摇晃使其解冻，直至冻存管中无结晶（此过程尽量在2min内完成）；
2、准备15mL离心管，加入2-6mL完培，将冻存管中的细胞悬液移至离心管，1000 rpm离心3~5min；（比较难养的细胞可适量增加离心管中的完培）
3、吸弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种至无菌的培养器皿中，轻晃动混匀后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。
注：复苏第二天若细胞状态较好，但漂浮碎片较多可做换液处理；
复苏的细胞需要时间恢复状态，当复苏好后密度低于80%时，2天内暂时不要换液，细胞生长状态恢复后再进行后续传代等操作；
【细胞传代】
当细胞汇合度达到80%-90%，即可传代培养。
收集细胞：贴壁细胞可以参考以下方法1、吸去培养液，加入不含钙镁的PBS，轻轻润洗瓶底1-2次，吸弃PBS；2、加入0.25%胰酶-EDTA消化液（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），铺匀瓶底放入培养箱中消化1-2min；（部分细胞贴壁较牢，可采用分步消化：将消化下来的细胞转移至离心管终止，在培养瓶中加入胰酶继续消化，直至大部分细胞脱落）3、倒置显微镜下观察大部分细胞变圆脱落，迅速加入完全培养基终止消化，完培与胰酶比例为2:1；4、轻轻吹打细胞后吸出转移至离心管中。半贴壁半悬浮细胞需先收集悬液至离心管再参考贴壁细胞操作。
离心：收集好的细胞在1000rpm条件下离心3~5min，离心好后弃除上清液。
接种：准备好新的培养瓶并添加适量完全培养基，在离心管加入1-2mL完全培养基重悬吹打均匀，初次传代将细胞悬液按1:2比例接种到新的培养瓶中，后续可根据细胞实际情况按1:2-1:4的比例传代；接种完成后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。
悬浮细胞建议采用半换液传代：将培养瓶站立静置5-10min，肉眼可见细胞沉底，吸取1/2~2/3上清至离心管离心，将瓶内剩余悬液按1:2或1:3的比例转移至新的培养瓶，将离心管中的细胞重悬后放入培养瓶添加新鲜完全培养基即可。
【细胞冻存】
收集细胞参考细胞传代步骤。
冻存液重悬：细胞按照传代步骤收集细胞至离心管并计数，根据计数的密度决定细胞冻存数量，一般推荐细胞冻存密度为1×106-1×107个活细胞/管。离心后弃上清，加入配制好的冻存液重悬，分配到冻存管中，每管1mL。
冻存：将冻存管放入程序降温盒中进行梯度降温，然后放入-80℃冰箱降温，24h后将冻存管转入液氮罐中。若没有冻存盒，可于冰箱4℃放置30min，随后转移至-20℃冷冻2h，接下来将其放于-80℃超低温冰箱中过夜，最终放置于液氮中以长期保存。
参考文献：[1]林武,黄昭帅,鲍苗,等.胚胎干细胞分泌因子增强AML-12细胞抗凋亡能力[J].温州医科大学学报,2018,48(06):408-412.
