一、原核表达实验原理
1、E . coli表达系统
E . coli是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。
2、外源基因的诱导表达
提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。不同的表达质粒表达方法并不完全相同，因启动子不同，诱导表达要根据具体情况而定。
二、原核表达实验流程
大肠杆菌和酵母蛋白表达系统
中心合成基因（另外收费）或者客户提供模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
构建表达载体
筛选阳性克隆
表达优化和可溶性分析
SDS-PAGE检测表达
Western blot检测表达（可选）
三、注意事项
（1）所有操作尽量在冰上操作，以避免蛋白质发生变性；
（2）根据自己的需要选择不同的表达载体，并注意不同的表达载体上的融合标签和携带的抗性基因，其中有些标签是可以去除的。
（3）构建好的载体最好进行测序验证，保证读码框正确，即没有移码。
（4）长期保存的pET重组子在高浓度甘油中会导致质粒不稳定。
（5）37 ℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体，而30 ℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。在某些情况下，低温（15－20℃）延长诱导时间可以使溶解性蛋白的产量达到最大。
（6）进行SDS-PAGE分析时，需优化电泳上样体积。
（7）制备多（单）克隆抗体的制备，可采用原核表达
1、E . coli表达系统
E . coli是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。
2、外源基因的诱导表达
提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。不同的表达质粒表达方法并不完全相同，因启动子不同，诱导表达要根据具体情况而定。
二、原核表达实验流程
大肠杆菌和酵母蛋白表达系统
中心合成基因（另外收费）或者客户提供模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
构建表达载体
筛选阳性克隆
表达优化和可溶性分析
SDS-PAGE检测表达
Western blot检测表达（可选）
三、注意事项
（1）所有操作尽量在冰上操作，以避免蛋白质发生变性；
（2）根据自己的需要选择不同的表达载体，并注意不同的表达载体上的融合标签和携带的抗性基因，其中有些标签是可以去除的。
（3）构建好的载体最好进行测序验证，保证读码框正确，即没有移码。
（4）长期保存的pET重组子在高浓度甘油中会导致质粒不稳定。
（5）37 ℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体，而30 ℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。在某些情况下，低温（15－20℃）延长诱导时间可以使溶解性蛋白的产量达到最大。
（6）进行SDS-PAGE分析时，需优化电泳上样体积。
（7）制备多（单）克隆抗体的制备，可采用原核表达
